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?高原的雨滴
?一片云飄過,地上一片陰影
?山腰的云
?清晨,炊煙裊裊
?草原上的馬
?高原花
?
?高原風光
?
?藍天白云
?青草地
?兩頭牦牛在斗牛
?像花一樣的————牛糞
?據(jù)說山上尖尖的地方是天葬臺?
?像牽牛花
?天上的光束
?食堂路上的狗
?溫泉
?這就是傳說中的:一朵鮮花插在牛糞上(純天然生長形成)
?高原草
?
1、電泳的基本原理 ???? ?電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團,它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電,在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術(shù)。 ?? ? ?電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進行。Tiselius等在1937年進行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),所以擴散和對流都比較強,影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進行電泳過程,減少了擴散和對流等干擾作用。最初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實驗室已經(jīng)應(yīng)用得較少。在很長一段時間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來進行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡單、方便。但對于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進了電泳技術(shù)的發(fā)展,使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝膠是淀粉凝膠,但目前使用得最多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。
????? 電泳裝置主要包括兩個部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm ? 14 cm,厚度為1mm~2 mm,近年來新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳時間。制膠時在凝膠溶液中放一個塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。由于pH值的改變會引起帶電分子電荷的改變,進而影響其電泳遷移的速度,所以電泳過程應(yīng)在適當?shù)木彌_液中進行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。 ? 為了更好的了解帶電分子在電泳過程中是如何被分離的,下面簡單介紹一下電泳的基本原理。在兩個平行電極上加一定的電壓(V),就會在電極中間產(chǎn)生電場強度(E),L是電極間距離。 ? 在稀溶液中,電場對帶電分子的作用力(F),等于所帶凈電荷與電場強度的乘積。 ? 這個作用力使得帶電分子向其電荷相反的電極方向移動。在移動過程中,分子會受到介質(zhì)粘滯力的阻礙。粘滯力(F’)的大小與分子大小、形狀、電泳介質(zhì)孔徑大小以及緩沖液粘度等有關(guān),并與帶電分子的移動速度成正比,對于球狀分子,F(xiàn)’的大小服從Stokes定律,即: ???????????????? F’=6πrηυ ? 式中r是球狀分子的半徑,η是緩沖液粘度,υ是電泳速度(υ= d / t,單位時間粒子運動的距離,cm / s )。當帶電分子勻速移動時: F = F’, ?????????????? ∴? q?E = 6πrηυ ? 由此可以看出,遷移率與帶電分子所帶凈電荷成正比,與分子的大小和緩沖液的粘度成反比。 ???? ?用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量時,實際使用的是相對遷移率mR。 ????? 帶電分子由于各自的電荷和形狀大小不同,因而在電泳過程中具有不同的遷移速度,形成了依次排列的不同區(qū)帶而被分開。即使兩個分子具有相似的電荷,如果它們的分子大小不同,由于它們所受的阻力不同,因此遷移速度也不同,在電泳過程中就可以被分離。有些類型的電泳幾乎完全依賴于分子所帶的電荷不同進行分離,如等電聚焦電泳;而有些類型的電泳則主要依靠分子大小的不同即電泳過程中產(chǎn)生的阻力不同而得到分離,如SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。分離后的樣品通過各種方法的染色,或者如果樣品有放射性標記,則可以通過放射性自顯影等方法進行檢測。
2、影晌電泳分離的主要因素?????
?待分離生物大分子的性質(zhì) ????? 待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質(zhì)都會對電泳有明顯影響。一般來說,分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快。 ?緩沖液的性質(zhì)(溶液的pH值) ????? 緩沖液的pH值會影響待分離生物大分子的解離程度,從而對其帶電性質(zhì)產(chǎn)生影響,溶液pH值距離其等電點愈遠,其所帶凈電荷量就越大,電泳的速度也就越大,尤其對于蛋白質(zhì)等兩性分子,緩沖液pH還會影響到其電泳方向,當緩沖液pH大于蛋白質(zhì)分子的等電點,蛋白質(zhì)分子帶負電荷,其電泳的方向是指向正極。為了保持電泳過程中待分離生物大分子的電荷以及緩沖液pH值的穩(wěn)定性,緩沖液通常要保持一定的離子強度,一般在0.02-0.2,離子強度過低,則緩沖能力差,但如果離子強度過高,會在待分離分子周圍形成較強的帶相反電荷的離子擴散層(即離子氛),由于離子氛與待分離分子的移動方向相反,它們之間產(chǎn)生了靜電引力,因而引起電泳速度降低。另外緩沖液的粘度也會對電泳速度產(chǎn)生影響。
???? 溶液的pH決定被分離物質(zhì)的解離程度和質(zhì)點的帶電性質(zhì)及所帶凈電荷量。例如蛋白質(zhì)分子,它是既有酸性基團(-COOH),又有堿性基團(-NH2)的兩性電解質(zhì),在某一溶液中所帶正負電荷相等,即分子的凈電荷等于零,此時,蛋白質(zhì)在電場中不再移動,溶液的這一pH值為該蛋白質(zhì)的等電點(isoelctric point,pI)。若溶液pH處于等電點酸側(cè),即pH<pl,則蛋白質(zhì)帶正電荷,在電場中向負極移動。若溶液pH處于等電點堿側(cè),即pH>pl,則蛋白質(zhì)帶負電荷,向正極移動。溶液的pH離pl越遠,質(zhì)點所帶凈電荷越多,電泳遷移率越大。因此在電泳時,應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì),選擇合適的pH值緩沖液,準確來說,SDS-PAGE的電泳緩沖液PH一般都為8.3。
電場強度 ???? 電場強度(V/cm)是每厘米的電位降,也稱電位梯度。電場強度越大,電泳速度越快。但增大電場強度會引起通過介質(zhì)的電流強度增大,而造成電泳過程產(chǎn)生的熱量增大。電流在介質(zhì)中所做的功(W)為: ????????????? W=I2.R.t ? 上式中:I為電流強度,R為電阻,t為電泳時間。 ? 電流所作的功絕大部分都轉(zhuǎn)換為熱,因而引起介質(zhì)溫度升高,這會造成很多影響: ? ①樣品和緩沖離子擴散速度增加,引起樣品分離帶的加寬;②產(chǎn)生對流,引起待分離物的混合;③如果樣品對熱敏感,會引起蛋白變性;④引起介質(zhì)粘度降低、電阻下降等等。電泳中產(chǎn)生的熱通常是由中心向外周散發(fā)的,所以介質(zhì)中心溫度一般要高于外周,尤其是管狀電泳,由此引起中央部分介質(zhì)相對于外周部分粘度下降,摩擦系數(shù)減小,電泳遷移速度增大,由于中央部分的電泳速度比邊緣快,所以電泳分離帶通常呈弓型。降低電流強度,可以減小生熱,但會延長電泳時間,引起待分離生物大分子擴散的增加而影響分離效果。所以電泳實驗中要選擇適當?shù)碾妶鰪姸?,同時可以適當冷卻降低溫度以獲得較好的分離效果。 電滲 ???? 液體在電場中,對于固體支持介質(zhì)的相對移動,稱為電滲現(xiàn)象。由于支持介質(zhì)表面可能會存在一些帶電基團,如濾紙表面通常有一些羧基,瓊脂可能會含有一些硫酸基,而玻璃表面通常有Si-OH基團等等。這些基團電離后會使支持介質(zhì)表面帶電,吸附一些帶相反電荷的離子,在電場的作用下向電極方向移動,形成介質(zhì)表面溶液的流動,這種現(xiàn)象就是電滲。在pH值高于3時,玻璃表面帶負電,吸附溶液中的正電離子,引起玻璃表面附近溶液層帶正電,在電場的作用下,向負極遷移,帶動電極液產(chǎn)生向負極的電滲流。如果電滲方向與待分離分子電泳方向相同,則加快電泳速度;如果相反,則降低電泳速度。 支持介質(zhì)的篩孔 ? 支持介質(zhì)的篩孔大小對待分離生物大分子的電泳遷移速度有明顯的影響。在篩孔大的介質(zhì)中泳動速度快,反之,則泳動速度慢。
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實驗報告總結(jié)【1】
經(jīng)過半年的生化實驗的學(xué)習(xí)讓我受益菲淺。
在生化實驗課即將結(jié)束之時,我對在這半年來的學(xué)習(xí)進行了總結(jié),總結(jié)這一年來的收獲與不足。
取之長、補之短,在今后的學(xué)習(xí)和工作中有所受用。
這半年的生化實驗主要有folin-酚法測蛋白 稀堿法提取酵母RNA 醋酸纖維薄膜電泳 RNA定量測定-UV吸收法 纖維素酶活力的測定 最適PH選擇 菲林試劑熱滴定定糖法 肌糖元的酵解作用 N-末端氨基酸殘基的測定--DNS-CL法 柱層析分離色素 凱式定氮法等實驗。
在這些實驗中,凱式定氮法是給我印象最深的一個實驗,因為這個實驗使我認識了改良式凱式蒸餾儀的基本結(jié)構(gòu),同樣的也讓我通過這次實驗掌握了凱式定氮法的操作技術(shù)。
在這次實驗中,我和我的同組者-韓文志犯了一些錯誤,而且是很不應(yīng)該犯的錯誤,我們都忘了在做實驗時要加入新的沸石,這是個很低級的錯誤,差點引起溶液的暴沸。
通過這次錯誤我認識到,很多知識,即使是老師在怎么說,它也只是理論,當我們不能把它應(yīng)用到實踐中去時,它對我們都是毫無意義的。
現(xiàn)在更深的認識到了理論結(jié)合實際的觀點。
在這次實驗中我們損壞了改良式凱式蒸餾儀,并且賠了錢,錢不是問題,重要的是操作的問題,我覺得我們在做實驗時還是對儀器不是很熟悉,做實驗時不認真。
還有一個是柱層析分離色素,這個實驗主要是掌握吸附層析的原理和操作技術(shù),我記得這次實驗我是第二個到的實驗室,當時還很有成就感,進來后就稱菠菜,還有研磨,這是很累人的活,我覺得,因為想把它研磨的好些,又想
快點做實驗,于是就一直磨一直磨,直到做下一步時才覺得手腕有點累。
我記得在加棉花時,由于不知道應(yīng)該加多厚,提取色素時還很是膽戰(zhàn)心驚的。
我覺得在這個實驗中,裝柱這一步是很重要的,于是我們很小心的裝,直到柱面很平。
直到最后,分離色素后,看到我們的色帶分離的很好,很是高興。
半年實驗做下來,最“苦”的要數(shù)“菲林試劑熱滴定定糖法”這個實驗了。
這個實驗要求我們正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點。
由于全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進行,而且終點不容易把握,我們滴了好幾十次才確定了終點。
當時我的同組者-韓文志已經(jīng)被火烤的不行了。
在這半年的十幾次的實驗的學(xué)習(xí)中,我受益頗多。
毫無疑問,它培養(yǎng)了我的動手能力。
每個實驗我都會親自去做,不放棄每次鍛煉的機會。
經(jīng)過這半年,我的動手能力有了明顯的提高;它讓我養(yǎng)成了課前預(yù)習(xí)的好習(xí)慣。
一直以來就沒能養(yǎng)成課前預(yù)習(xí)的好習(xí)慣(雖然一直知道課前預(yù)習(xí)是很重要的),但經(jīng)過這半年,讓我不僅深深的懂得課前預(yù)習(xí)的重要,更領(lǐng)會了課前預(yù)習(xí)的好處。
只有在課前進行了認真的預(yù)習(xí),在做實驗時效率才會更高,才能收獲的更多、掌握的更多;它還提高了我處理數(shù)據(jù)的能力;做實驗就會有數(shù)據(jù),有數(shù)據(jù)就要處理,數(shù)據(jù)處理的是否得當將直接影響實驗成功與否。
半年實驗雖然收獲很多,但在這中間,我也發(fā)現(xiàn)了我存在的很多不足。
我的動手能力還不夠強,當有些實驗需要很強的動手能力時我還不能從容應(yīng)對;我的探索方式還有待改善,當面對一些復(fù)雜的實驗時我還不能很快很好的完成;我的數(shù)據(jù)處理能力還得提高,當眼前擺著一大堆復(fù)雜數(shù)據(jù)時我處理的方式及能力還不足,不能用最佳的處理手段使實驗誤差減小到最小程度…… 總之,生化實驗課讓我收獲頗豐,同時也讓我發(fā)現(xiàn)了自身的不足。
在實驗課上學(xué)得的,我將發(fā)揮到其它中去,也將在今后的學(xué)習(xí)和工作中不斷提高、完善;在此間發(fā)現(xiàn)的不足,我將努力改善,通過學(xué)習(xí)、實踐等方式不斷提高,克服那些不應(yīng)成為學(xué)習(xí)、獲得知識的障礙。
在今后的學(xué)習(xí)、工作中有更大的收獲,在不斷地探索中、在無私的學(xué)習(xí)、奉獻中實現(xiàn)自己的人身價值!
實驗報告總結(jié)【2】
立體構(gòu)成的概念特征及作用:
立體構(gòu)成是一門研究在三維空間中如何將立體造型要素按照一定的.原則組合成賦予個性的美的立體形態(tài)的學(xué)科。
整個立體構(gòu)成的過程是一個分割到組合或組合到分割的過程。
任何形態(tài)可以還原到點、線、面,而點、線、面又可以組合成任何形態(tài)。
立體構(gòu)成的探求包括對材料形、色、質(zhì)等心理效能的探求和材料強度的探求,加工工藝等物理效能的探求這樣幾個方面。
立體構(gòu)成是對實際的空間和形體之間的關(guān)系進行研究和探討的過程。
空間的范圍決定了人類活動和生存的世界,而空間卻又受占據(jù)空間的形體的限制,藝術(shù)家要在空間里表述自己的設(shè)想,自然要創(chuàng)造空間里的形體。
立體構(gòu)成中形態(tài)與形狀有著本質(zhì)的區(qū)別,物體中的某個形狀僅是形態(tài)的無數(shù)面向中的一個面向的外廓,而形態(tài)是由無數(shù)形狀構(gòu)成的一個綜合體。
立體構(gòu)成的構(gòu)成要素:
1、點的特征;
點型是形態(tài)中最初的元素,也是形態(tài)世界最小的表現(xiàn)極限,它在空間中呈飄浮狀態(tài),有長短,寬窄及運動方向,它是由各元素相互對應(yīng),相互比較而特定的,如隨著點與塊的縮小與擴大,它們之間互相的轉(zhuǎn)換,對形態(tài)上造型語言的不同會在心理上產(chǎn)生不同的感受,如角狀點型,有強烈的沖擊力,曲狀點型則有柔和的飄浮感。
其表現(xiàn)形式無限多,或方或圓或角或其他任何形狀,還可有實心與空心的變化。
2、線的特征:
線存在于點的移動軌跡,面的邊界以及面與面的交界或面的斷、切、截取處,具有豐富的形狀和形態(tài),并能形成強烈的運動感。
線從形態(tài)上可分為直線(平線,重直線,斜線和折線等)和曲線(孤線,螺旋線,拋物線,雙曲線及自由線)兩大表。
a、直線 垂直線 斜線的 b、曲線
幾何曲線能表達飽滿,有彈性、嚴謹,理智,明確的現(xiàn)代感覺,同時也有機械的冷漠感,自由曲線是一種自然的、優(yōu)美的、跳躍的線型,能表達豐闊、圓闊、柔和、富有人情味的感覺,同時也有強烈的活動感和流動感,例如大自然中閃電形成的自由曲線。
3、面的特征:
面作為構(gòu)成空間的基礎(chǔ)之一具有強烈的方向感,面的不同組合方式可以構(gòu)成千變?nèi)f化的空間形態(tài)。
面在空間形態(tài)上可分為平面和曲面兩種形態(tài),平面有規(guī)律平面和不規(guī)律平面,曲面有規(guī)律曲面和不規(guī)律曲面。
圓形總是封閉的,具有飽滿的,肯定的和統(tǒng)一的效果,能表現(xiàn)流動、運動、和諧、柔美的感覺不規(guī)則面的基本形是指一些毫無規(guī)律的自由形態(tài)。
4、塊的特征:
塊體的基本特征是占據(jù)三維空間,塊體可以由面圍合而成,也可以由面運動而成,大而厚的塊體能產(chǎn)生深厚、穩(wěn)定的感覺,小而薄的塊體,能產(chǎn)生輕盈飄浮的感覺,塊體可分為幾何平面體,幾何曲面體,自由體和自由曲面體等。
幾何平面體包括正三角錐體、正立方體、長方體和其它的幾何平面所構(gòu)成的多面立體,具有簡練大方、莊重、嚴肅、穩(wěn)定的特點。
這些就是我在立體構(gòu)成課程期間所學(xué)的知識以及我自己的作品。
雖然還有很大的欠缺,我想以后在學(xué)習(xí)的過程中,我會不斷的學(xué)習(xí)不斷的進步,讓我的作品更有創(chuàng)造力,更美觀,更能跟上時代的潮流,甚至超越時代的潮流。
0610030211
萬莉
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